洁净工作台用于菌种液氮保藏工艺优化

    菌种保藏的方法很多，对于食药用菌，液氮保 藏是一种公认的、长久有效的保藏方法，然 而陈燕妍在对担子菌菌种 24 属 43 种 122 株进行液 氮保藏时发现，灵芝属的菌株有较明显的失活， 顾金刚也指出，菌种进行液氮保藏需要对其进行优 化才能得到较好的保藏效果。鉴于此，本文以 灵芝菌种为材料，对影响液氮保藏效果的降温速 率、保护剂浓度、解冻温度、培养基质和菌饼大小 等方面进行系统研究，以期掌握灵芝菌种的液氮保 藏技术，使之在灵芝种质资源的保藏中得到更好地 应用。恒温培养箱 ( SHP-250 型，上海精宏实验设备 有限公司) ，超净工作台 ( SW-CJ-2FD 型，上海博 迅实业有限公司医疗设备厂) ，手提式高压蒸汽灭 菌锅 ( YXQ-LS18SI 型，上海博迅实业有限公司医 疗设备厂) ，Cryo GenesisTMV5 程序降温仪 ( 广州 倍玛特仪器设备有限公司) ，恒温水浴锅 ( HH-USA，上海赫田科学仪器有限公司) ，液氮罐 ( YDS30，山东博科科学仪器有限公司)。

    在液氮保藏中涉及多种因素，因此，找到最优 的工艺是进行液氮保藏的核心。以往降温处理过程 中，真菌一般常用的程序是以每分钟 1 ℃ 降温至 －30～ －40 ℃，然后迅速放入液氮中。本文对 灵芝菌种的降温程序进行优化时也发现，在 4 ～ －40 ℃时，以每分钟 1 ℃速率进行降温，菌种的活 力最高，但在常温降至 4 ℃，却是以每分钟 4 ℃或 9 ℃的效果最好。而刘新锐等 在采用相同降温 程序对香菇菌种进行液氮保藏时，复苏后的菌种生 长速度无差异，这可能是不同种类食药用菌本身的 特性差异引起的。