皂苷类活性成分积累分析！！！

    多生于荫蔽湿润的环境，可见其对光照温 度有一定的要求，关于不同光照条件对珠子参皂苷 类次生代谢产物积累及同工酶表达笔者还未见研 究，因此用光照调控试验，以揭示珠子参中不同同工 酶与次生代谢产物积累的相关性，掌握珠子参的生 长发育规律，探讨不同光照对珠子参生长以及皂苷 类次生代谢产物积累的影响。MGC － 300H 人工气候箱( 上海一恒科学有限公 司) ，Waters 2695 高效液相色谱仪，BIO － ＲAD 电泳 仪及 BIO － ＲAD mini 垂直电泳槽( 美国伯乐公司) ， GB204 型电子分析天平 ( 北京赛多利斯仪器系统有 限公司) ; KQ － 200KED 超声波清洗机 ( 江苏昆山超 声波仪器有限公司) ; GZX － 9140MBE 电热鼓风干 燥箱 ( 上海博迅医疗设备有限公司) 。

    CAT 同工酶用 铁染色法，SOD 同工酶用氮蓝四唑法，POD 同工酶 用联苯胺法。取 0. 1 g 根茎，液氮研磨，加入 10 mmol /L Tris － HCl PH 7. 4 缓冲液，料液比 1∶ 10，浸 提 24 h，10000 rpm 离心 10 min，取上清液，加入等量 40% 蔗糖溶液于 － 20℃ 冰箱保存备用，采用聚丙烯 酰胺凝胶垂直版电泳系统分析。SOD 和 POD 采用 浓度为 10% 分离胶，CAT 为 7. 5% 分离胶，浓缩胶均 为 3% 的分离度，Tris － Gly( PH 8. 3) 作为电泳缓冲 液，上样量为 20 μl，电泳在冰上进行，浓缩胶电流 15 mA，溴酚蓝指示剂通过分离胶改为 20 mA，电泳 至含 40% 蔗糖溶液的溴酚蓝指示剂迁移至距胶板 1 cm 时 停 止 电 泳。数据处理采用 Excel 2010，SPSS 19. 0 数据统计 软件进行数据分析，用单因素方差分析( One － way ANOVA) 和最小显著差异法( Least significant difference，LSD 法) 进行数据显著性分析。