VB12 检测方法主要有液相色谱法、液 质联用法、酶联免疫法、原子吸收光谱法、化学发光分析法、微生物法等。 微生物法是经典的 VB12 测定方法,利用莱式曼 氏乳杆菌对 VB12 的特异性,可灵敏地检测出基 质中 VB12,微生物法具有特异性强、灵敏度高、 检出限低、不易漏检的特点。超净工作台:HCB-1300V 型,海尔生物医 疗有限公司;分析天平:AL-204 型,赛多利 斯科学仪器有限公司;生化培养箱:LRH-250F型,上海一恒科学仪器有限公司;立式压力蒸汽 灭菌锅:YXQ-LS-50S II 型,上海博迅医疗生物 仪器股份有限公司;紫外分光光度计:UV-1800 型,日本岛津;离心机:LD5-2B 型,广州市丹 安仪器仪表有限公司;pH 计:PHS-3C,上海精 科仪器有限公司。
采取的是进口 美国菌株,较之前国产菌株活性及稳定性、纯度 更好。标准菌株莱式曼氏乳杆菌的活性和浓度是 影响微生物法检测 VB12 成功的基础和前提,莱 式曼氏乳杆菌为厌氧菌,在试验用菌的传代培养 过程中,要严格执行厌氧条件,并控制好传代次 数;标准系列及样品液的培养时间、pH、培养温 度会影响莱式曼氏乳杆菌的生长繁殖,也需要严 格控制这些生长条件。之前一直用国外 BD 培养基,成本比较高,目前国产培养基也能够达 到良好的试验结果,且成本相对较低。