获得 HMOs 的绝对含量,仍然需要标准品 和标准曲线的方法。本试验应用 LC-MS 建立快速、 稳定、灵敏度高的检测母乳中低聚糖定性及定量的方 法,应用该方法分析不同哺乳期过程中各种低聚糖的 变化情况。Waters TQ-S 电 喷 雾 质 谱 仪 ,Waters Acquity UPLC system,美国 Waters 公司;Eppendorf 5430R 低 温高速离心机,德国 Eppendorf 公司;SW-CJ-2FD 超 净工作台,上海博迅实业有限公司。色谱柱:Inertsil Hilic柱(2.1 m× 150 mm);流动相:A 液为乙腈,B液为50 mol/L 乙酸铵溶液(pH 4.5)。样品 置于4 ℃自动进样器中,柱温40 ℃,流速400 μL/min, 进样量5 μL。梯度洗脱条件:95%流动相A和5%流动 相B洗脱2 min,然后至13 min流动相B由5%至25%, 然后至18 min流动相B由25%至50%,保持洗脱6 min。
采用 Waters TQ-S 电喷雾质谱仪对不同 泌乳期的母乳低聚糖进行检测,我们将不同泌乳期的 母乳分为初乳、过渡乳及成熟乳。其中,初乳是生产 后第1到第12天的母乳,过渡乳是生产后第13天至第 30 天的母乳,成熟乳是生产后第 2 个月以后的母乳。 在收集的所有不同泌乳期母乳样品中,检测到 6种 HMOs的组成和含量均在不断 变化。其中 2'-FL、6'-SL、LNnT、LNFP-I 的含量随 着泌乳期的延长而逐渐降低。通过检测分析产妇泌乳后母乳低聚糖含量及组 分变化情况发现,通过自然生产的产妇母乳中低聚糖 的含量与剖腹产产妇母乳中低聚糖的含量有一定的 差异。其中,通过自然生产的产妇母乳中2'-FL、LN⁃ FP-I的含量均略高于剖腹产产妇母乳中的含量。而 剖腹产产妇母乳中 LNnT 的含量则略高于自然生产 的产妇母乳中的含量。