脉动真空灭菌灭菌效果验证

备注说明 ：下面灭菌效果验证中使用的 3 种无菌检验用培养基分别按各自培养基的使用说明配制并分装在 6 分管中，每支分装 6mL~8mL，盖上胶塞经 116℃，1800s 高压灭菌后无菌检验合格备用。

方法一 ：无菌（纯粹）检验法

检验过程：将高压灭菌后的 MEM 溶液（在室温放置 24h，然后移至层流罩（局百环境）下用 5mL 无菌注射器取样，并分别接种硫乙醇酸盐流体培养基 2 支、胰酪大豆胨液体培养基1 支和酪胨琼脂培养基 2 支，每支接种 0.2mL，分别在 25℃（硫乙醇酸盐流体培养基、胰酪大豆胨液体培养基和酪胨琼脂培养基各一支）和 37℃（硫乙醇酸盐流体培养基和酪胨琼脂培养基各一支）条件下培养 7 天，每天观察并记录检验结果。检验结果 ：观察 7 天，无菌检验培养基中均无菌落生长，无菌检验合格。

方法二 ：细胞培养检验法

检验过程：在高压灭菌后的 MEM 溶液中加 10% 胎牛血清后贴壁培养 MDBK 细胞，并 37℃培养 3 天，每天观察细胞是否染菌。检验结果：3 天后细胞生长良好，显微镜镜检细胞轮廓清晰，视野干净，未见杂菌。

方法三 ：生物指示剂验证法

在高压灭菌 MEM 溶液时选择 3 个温度可能最低的点分别放置生物指示剂 , 常用的生物指示剂嗜热脂肪芽孢杆菌Bacillusstereathernophilus，其常规微生物耐热参数 D 值为 121℃（1.5min~3.0min）。一同灭菌，灭菌结束后将灭菌后的生物指示剂及时取出并置于 56℃培养箱中培养 48h，随后取出培养后的生物指示剂，观察安瓿的内容物颜色，并与生物指示剂照片进行比较观察。检验结果 ：48h 培养后的生物指示剂颜色呈紫红色且澄清，说明该灭菌过程可有效杀灭孢子菌。

验证结果重复上述验证，连续三次，结果均符合要求。