绿脓杆菌是能够引起急性、高度传染性疾病的、 可以导致水貂出血性肺炎的一种细菌。本菌革兰氏 染色呈阴性,单个、成双或短链状存在,能单向运 动,无芽孢,能形成荚膜,能分泌绿脓菌素和荧光素。超净工作台(SW.CJ.2FD)购自上海博迅实业 有限公司医疗设备公司;空气恒温摇床(KYC111) 购自上海福玛实验设备有限公司;PCR 仪(T100TM Thermal Cycler)购自伯乐生命医学产品有限公 司;电热恒温水槽(DK-8D)购自上海精宏实验设 备有限公司;隔水式培养箱(BG-160)购自上海博 迅实业有限公司医疗设备厂;光学正置显微镜(Axio Lab. A1)购自卡尔蔡司公司。
将绿脓杆菌菌种复苏后分别用接种环划线接种 于 PYG 平板,置 37 ℃培养 18 h。各挑取单菌落再 次分别划线接种于 PYG 平板,置 37 ℃培养 18 h, 各用 5 mL 生理盐水将平板上的菌落洗下,制备成 浓度均一的凝集原(菌数为 8×109 CFU/mL),2 ~ 8 ℃保存备用。准备洁净的载玻片,用记号笔分区 标记后,取 20 µL 制备的绿脓杆菌凝集原滴于载玻 片上,再取待检的水貂血清(简称待检血清) 20 µL 置于凝集原上,同时取 20 µL 绿脓杆菌凝集 原加 20 µL 生理盐水作为阴性对照,取 20 µL 绿脓 杆菌凝集原加 20 µL 绿脓杆菌抗水貂阳性血清(玻 片凝集反应至少出现“+++”)作为阳性对照,用 枪头将凝集原和待检血清混合,在 30 ~ 60 s 内用 肉眼观察结果。